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抗體常見問題-卡米洛

發(fā)布時(shí)間: 2022-02-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1001次

                                                抗體常見問題-卡米洛

解決方案



邊緣效應(yīng)

 

組織邊緣貼附不牢,邊緣組織松脫漂浮于液體中

APES/多聚賴氨酸處理玻片;組織切片盡量?。槐M量避免選用壞死較多的組織

試劑未充分覆蓋組織

滴加試劑時(shí)讓試劑*覆蓋組織

非特異性染色體

 

 

 

 

 

 

 

 

 

抗體質(zhì)量問題

使用質(zhì)量有保證的抗體

抗體孵育時(shí)間長

減少孵育時(shí)間

抗體濃度過高

降低抗體濃度

一抗為多抗

使用單克隆抗體

內(nèi)源性過氧化物酶及生物素

延長滅活時(shí)間

封閉不足

延長封閉時(shí)間

DAB孵育時(shí)間過久或濃度過高

按說明書配置試劑,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間

抗體孵育后洗滌不充分

每次孵育之后洗3*5

滴加試劑時(shí)干片

及時(shí)滴加試劑

切片在緩沖液中浸泡過久

抗原修復(fù)之后及時(shí)封閉加一抗,不能過夜

陰性結(jié)果

 

 

 

 

 

 

抗體濃度及質(zhì)量

選擇有質(zhì)量保證的抗體,先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索抗體使用濃度

抗原修復(fù)不全

摸索合適的抗原修復(fù)方式及修復(fù)時(shí)間

抗原豐度

正常陰性

封閉時(shí)間過長

減少封閉時(shí)間

DAB孵育時(shí)間短

鏡下控制顯色時(shí)間

細(xì)胞通透不全,抗體未能進(jìn)入細(xì)胞反應(yīng)

選擇合適的通透劑及其反應(yīng)時(shí)間

一抗二抗不匹配

選擇正確來源的二抗

脫片

 

 

 

 

 

玻片未處理好

玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理

切片厚薄不均勻

更換刀片;調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)

烤片時(shí)間或溫度不夠

60攝食度2小時(shí)

組織自身問題

腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片

抗原修復(fù)時(shí)溫度迅速變化

抗原修復(fù)后讓其自然冷卻

操作時(shí)用力過猛

有脫片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水紙吸干殘余液體

染色弱

 

 

 

抗體濃度低,孵育時(shí)間短

提高抗體濃度,延長反應(yīng)時(shí)間

試劑使用超過有效期

試劑定時(shí)更新

滴加試劑時(shí)殘余緩沖液過多使試劑稀釋

滴加試劑前盡量減少殘余液體

封閉過度

減少封閉時(shí)間

著色不均勻

 

 

 

切片厚度不一致

更換刀片;調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)

試劑配制未混勻使局部濃度不一致

試劑充分混勻后滴加

試劑未*覆蓋組織

滴加試劑時(shí)讓試劑*覆蓋組織

脫蠟不*

更換脫蠟劑或延長脫蠟時(shí)間






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