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使用ELISA試劑盒之前,建議多了解一些相關(guān)知識(shí)

發(fā)布時(shí)間: 2021-04-02  點(diǎn)擊次數(shù): 826次
  ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法:例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISAKit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。本品自從60-70時(shí)代問(wèn)世以來(lái),得到科研工作者的認(rèn)可及推重,在歐美及我國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化范疇的長(zhǎng)足發(fā)展。它是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)確診方法。由于其試劑安穩(wěn)、易保存,操作簡(jiǎn)潔,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗(yàn)的各范疇中。是用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)。
  ELISA試劑盒在實(shí)際測(cè)定操作中要留意以下幾點(diǎn):
  一、溫度
  1.試劑盒回溫
  大多數(shù)試劑盒為冷藏(2℃-8℃)保存。從冰箱拿出來(lái)后,先不要急于翻開(kāi)試劑盒,要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無(wú)冷凝水。檢測(cè)所用的試劑需充分混勻且溶解后再用。提早1~2小時(shí)取出試劑盒,放在室溫中;或在預(yù)設(shè)25℃恒溫培養(yǎng)箱中平衡30分鐘~60分鐘。
  2.環(huán)境溫度的操控
  可采用以下辦法操控溫度:
  1)試驗(yàn)室應(yīng)配備溫濕度表,且確保定時(shí)計(jì)量。
  2)依據(jù)天氣情況設(shè)定試驗(yàn)室空調(diào)制冷或加溫功能,待室溫安穩(wěn)且無(wú)攪擾的條件下再開(kāi)端檢測(cè)流程。
  3)選用帶溫控設(shè)備的孵育儀器,如恒溫孵育器、恒溫培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。留意要提早敞開(kāi)預(yù)熱。
  3.孵育
  孵育時(shí)要確保溫度均勻,防止蒸發(fā)變干。孵育時(shí)運(yùn)用封板膜,并置于暗處孵育。多塊板一起試驗(yàn)時(shí),要平放各板,不要疊放,避免溫度擴(kuò)散的不均勻性或邊緣效應(yīng)。
  二、加樣
  1.加樣要快速準(zhǔn)確,時(shí)刻宜操控在15分鐘內(nèi)。
  2.如樣品量較大,可分次完成試驗(yàn),或?qū)y(cè)樣液置于預(yù)混微孔板中運(yùn)用多通道移液器快速移取。
  3.汲取同一試劑,可將試劑倒入V型加樣槽中,運(yùn)用多通道移液器快速移取。
  三、妥善保存
  試劑盒至室溫后,取出要運(yùn)用的酶標(biāo)板孔,未運(yùn)用的酶標(biāo)板孔應(yīng)及時(shí)放回鋁箔袋,加入干燥劑,封緊封口,2℃-8℃冷藏保存。切忌將未平衡至室溫的酶標(biāo)板放回鋁箔袋,因?yàn)榇丝桃驗(yàn)闇囟炔?,酶?biāo)板上會(huì)有水汽,不利于安穩(wěn)保存。大多數(shù)試劑盒加樣后反應(yīng)時(shí)刻較短,環(huán)境溫度對(duì)檢測(cè)成果會(huì)有很大影響,所以操控好環(huán)境溫度是確保試劑盒檢測(cè)成果有用的重要因素。
  此外,這些試驗(yàn)忌諱,是您萬(wàn)萬(wàn)不可觸碰的:
  1、濃洗刷液或許會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗刷時(shí)不影響成果。
  2、如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋必定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)終乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
  3、各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器,并常常校正其正確性,以防止試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)目多,舉薦運(yùn)用排槍加樣。
  4、封板膜只限一次性運(yùn)用,以防止交叉污染。
  5、嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,ELISA試劑盒試驗(yàn)成果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
  6、從冷躲環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝進(jìn)密封袋中保存。
  7、所有樣品,洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
  8、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

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