發(fā)布時(shí)間： 2021-04-12 點(diǎn)擊次數(shù)： 897次
胰島素ELISA試劑盒主要由標(biāo)記試劑（R1）和固相試劑（R2）組成。標(biāo)記試劑組成：吖啶翁酯標(biāo)記鼠抗胰島素單克隆抗體、碟丹化鈉、牛血清白蛋白；固相試劑組成：順磁性顆粒結(jié)合鼠抗胰島素單克隆抗體、碟丹化鈉、牛血清白蛋白。
用夾心ELISA試劑盒測(cè)定人胰島素水平。用純化的人胰島素自身抗原包被微孔板制成固相抗原。將胰島素自身抗體依次加入包被的微孔板中，與HRP標(biāo)記的胰島素自身抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)記的抗原復(fù)合物。洗滌后，加入TMB顯色。
胰島素ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟及計(jì)算方法介紹：
一：本產(chǎn)品的使用步驟如下
1）將所需數(shù)目的板條置于板架上。。
2）用一次性吸嘴將標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和樣品分別25μL加入相應(yīng)的檢測(cè)孔中。
3）每孔加入25μL的酶聯(lián)物。
4）充分混合10秒，在此步驟中充分混合非常重要。
5）室溫下溫育30分鐘。
6）快速丟棄測(cè)試孔中的內(nèi)容物，向每個(gè)孔中加入400μl洗滌液，將板洗三次，并在吸水紙上拍打干燥，以除去殘余液體。注：清洗過(guò)程的正確操作將顯著影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和準(zhǔn)確性。
7）每孔加入50μL的酶復(fù)合物。
8）在室溫下溫育30分鐘。
9）快速棄去檢測(cè)孔中的內(nèi)含物，每孔加入400μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
10）每孔加入50μL的底物液。
11）在室溫下溫育15分鐘。
12）每孔加入50μL的終止液終止反應(yīng)。
13）在加終止液后10分鐘內(nèi)于450±10nm處讀取OD值。
二：胰島素ELISA試劑盒計(jì)算結(jié)果
1)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光度。
2)以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的平均吸光率和其相對(duì)應(yīng)的濃度值，繪制一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3)利用樣品的平均吸光率，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出其相應(yīng)的濃度值，
4)自動(dòng)方法：使用計(jì)算機(jī)三次方模式﹑四參數(shù)模式或雙對(duì)數(shù)函數(shù)的計(jì)算機(jī)程序可得到結(jié)果。
5)樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線中獲得。如果樣品的濃度高于高標(biāo)準(zhǔn)，則需要進(jìn)一步稀釋。計(jì)算濃度時(shí)，乘以樣品的稀釋倍數(shù)。
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